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月季组织培养技术

放大字体  缩小字体 发布日期:2012-02-12  来源:青青花木网  浏览次数:857

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       一、培养意义
       月季属蔷薇科蔷薇属多年生草本植物,每年多次开花,而且香味怡人,在观赏植物中地位很高。另一大优点是分布极广,适应性强,栽培容易。使得月季无愧于“花中皇后”之美誉,古今中外文人墨客咏叹月季的佳作,不胜枚举。多伦县就是一个月季之乡,但品种比较单一,更新换代缓慢。随着组织培养技术的应用,多伦县农业技术推广中心于2000年11月引进组织培养全套设备,成功培育了大量优质月季组培苗,填补了市场空白,对加速新老品种更新换代,迅速普及名优新品种起到了重要作用。
      二、培养程序
    (一)无菌培养的建立
    (1)选条
       从中国科学院、中国农科院等一级科研机构引进6个月季优良品种,分别是“红双喜”、“白雪山”、“彩云”、“和平”、“皇冠”、“金丝鸟”。选取生长健壮的当年生枝条,用饱满而未萌发的侧芽作为外植体。以枝条中段芽最好,因为接种后,中段芽第5天左右就能萌发,而基部和梢部的芽往往迟至15天才萌发。
    (2)培养基的配制
       整个培养过程都可用MS培养基,诱导芽萌发所加的植物激素只需要BA一种即可,每升用0.3~1.Omg,6个品种均适用,只是萌发迟早有些差别。
    (3)清洗外植体
       采回的枝条切去叶,再剥去附在茎上的叶柄及皮刺,先整段用洗手刷沾浓洗衣粉水仔细刷洗,再用自来水冲洗,毛巾擦干,放置在小木板上,用利刀切成2~3厘米一段,每段至少一个侧芽,装入消毒过的培养皿,放在超净工作台上,打开紫外灯,做表面灭菌30分钟。
    (4)消毒与接种
       在超净工作台上,用饱和漂白粉上清液作表面灭菌25~30分钟,灭菌时间快到时,即倾去灭菌溶液,用无菌水涮洗数次,无菌纱布吸干茎段外表水分,按无菌操作要求,接种到小试管里,从芽萌发到芽长到1厘米左右需要2~3周。
    (5)培养
       培养温度21℃最好,最高不超过25℃,有昼夜温差,光照10~12小时/天,光强800~1200LX。
    (二)继代增殖
    (1)将上述无菌芽从原茎段上切下,转接到MS+BA1-2+1AA0.1-0.3或MS+BA1-2+NAA0.01-0.1的培养基上,促使嫩茎长出更多的侧芽,原茎段弃去。继代增殖培养基每升用蔗糖30克。  
    (2)5周后,“红双喜”增殖了3.5倍,“白雪山”4.1倍,“和平”、“彩云”5~6倍,“皇冠”、“金丝鸟”达15倍。
    (3)每5~6周做一次继代增殖,继代前先制备好培养基,然后在无菌操作条件下,将月季嫩茎切成1~2节一段,投入新鲜的增殖培养基上,月季小苗就会按几何级数增殖起来,也可以将大苗转入到生根培养基上。
    (4)壮苗培养
       ①对增殖倍率高的品种,所增殖的嫩茎很细弱,要求进行一次壮苗培养,以取得适合生根和今后移栽的苗子。壮苗培养的培养基为:MS+BA0.3-0.5+NAA0.01-0.1,如果并不特别强调繁殖速度,也可以一直使用这种培养基,以壮苗为主,增殖为辅,使增殖与壮苗合为一步。②培养条件。光照10~12小时/天,光强800~1800LX,温度20~23℃,最高24~26℃。
    (5)生根与移栽
      月季嫩芽生长到一定长度时,就应切割下来,转入生根培养基。切下的嫩芽长度以2~3厘米为宜,让幼苗基部伤口愈合,已长出根原基,幼根尚未长出,即出瓶种植。这种方法不会损伤根系,移栽速度快,成活率高。
    (a)以MS培养基为基础,配方为MS+NAA0.5,此外加入300mg/L活性炭,30g/L蔗糖。插植2厘米以上无根嫩茎,经2周左右出现根原基,幼根尚未长出即出瓶种植。
     (b)移栽。幼苗出瓶后,先洗去沾附的琼脂培养基,再种植到粗沙+园田土(1:3)介质中,总的原则是疏松透气,有一定的保水、保肥能力。种植密度2~3厘米×4~6厘米/株,移栽完毕浇透水,并用0.1%的百菌清、多菌灵或甲基托布津等喷雾保苗,能显著提高成活率。
     (c)移栽后管理。移栽后需保持相对湿度85%以上,在温室、拱棚中移栽,覆好遮荫网,一般成活率都比较高,并注意通风和温度管理。4~6周后,须做好第二次移植,通常植入5厘米×9厘米的塑料杯中,每杯种1苗,再经4~6周,地上、地下部分都充分生长,有些植株还能开花,此时即可出售,或上盆种植,利于观赏。
     (d)移栽后植保工作。首次移栽1周后,可少量的追肥,视苗大小,浓度逐渐由0.1%提高到0.3%左右,施用种类有复合肥、尿素、磷酸二氢钾,MS培养液等,通常每7~10天喷一次杀菌剂,如百菌清等保苗,也可结合喷药施肥,以减少管理用工。试管苗第二次移栽后,管理上仍不可放松,须注意除草、施肥、防治病虫害,及时掐去顶芽,尤其是花蕾,以促进侧芽的生长,促使早日壮大。
       三、影响月季增殖的因素
      1.BA用量及侧芽在茎段上的位置对侧芽发育的影响。用“和平”品种月季的枝条,均等分为6段,取每段的一个侧芽培养在无激素的MS基本培养基上,23天后可见接近枝条最顶端和紧挨着枝条基部的芽发育最慢,而枝条中部的芽发育比较快。
       在不同浓度BA的MS培养基上,BA含量为0.03~0.3毫克/升的培养基,促进“皇冠”“彩云”侧芽的发育,如果BA超过O.3mg/L,则延迟芽的发育,但对于茎段中部的芽影响较小。
       2.摘心对茎增殖的影响。在继代培养的接种操作时,切去嫩芽的顶芽后,再转接到新的培养基上,对嫩芽增殖有很大的促进作用。
       3.赤霉素的影响。试用了赤霉素,其浓度为0.1、0.3、1、3、10、30和100毫克/升,试验发现所有浓度都抑制茎增殖,随着其浓度增高,茎增殖数下降,赤霉素浓度增加,还出现细长的嫩茎和发育不全的叶子,畸型植株等。
       4.嫩芽长度对形成多芽苗的影响。茎尖在1~10毫米长短时,对形成多芽苗最有效,不但百分率高,而且每个茎段的侧枝数也比较多,切割过短或过长都对茎的增殖不利,芽苗形成较少。切割过长会表现出叶子衰老等不利的现象,最适宜的茎尖长度为6~10毫米。
       5.每次继代培养所需时间对嫩茎增殖的影响。在MS+BA3+IAA0.3的培养基上,“红双喜”月季的培养时间为28天,继代一次较好,超过28天,茎的数目已不再增加。
       6.MS配方和无机盐浓度。试验证明,全量的MS无机盐对茎增殖效果最好。
       四、影响月季生根和移栽成活率的因素
      1.不同生长素种类和浓度对月季生根和移栽成活率的影响。以“彩云”为材料,用NAA、IAA两种不同浓度的生长素做生根试验,发现用NAA诱导生根和提高移栽成活率效果最好,浓度为100ppm为宜,发现以IAA诱导生根和提高移栽成活率效果并不理想,其浓度只能在1mg/L以下,超过时对生根的促进作用已不显著,反而大幅度降低移栽成活率。
       2.无机盐浓度和含糖量对月季生根的影响。采用较低浓度的无机盐对月季生根效果较好。但糖浓度不可降低。否则削弱苗的生长势。试验证明1/2MS+30克/升蔗糖利于生根。
       3.琼脂用量及对生根的影响。琼脂粉用量在4~5克/升的范围内对生根效果影响没有显著差别,以4克/升稍优,用最小不利于凝固,用量大培养过硬不利于扎根。
      五、结论
      用组织培养的方法生产月季试管苗不仅生产周期短,而且繁殖倍数高,周年均可生产,年可生产月季试管苗50万株,经济效益,社会效益都很可观,建议业界同仁能够关注此项事业。

 
 
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